透射電子偏光顯微鏡及超薄切片
發(fā)布人：shpuda發(fā)布時間：2014/1/24
食用菌和其他微生物一樣，也適于使用電鏡進(jìn)行觀察研究。食用菌的孢子、子實體、菌絲體及其感病組織，包括病毒顆粒，都可采用電鏡，進(jìn)行超微檢驗或深人探索。
超薄切片的基本程序及其原理和偏光顯微鏡配套使用的石蠟切片頗為相似，也包括研究材料的固定，脫水，染色，透明，包埋，切片等步驟。不過，具體的試劑和方法需要和電鏡的性能相適應(yīng)。
首先，將實驗材料切成小塊，裝人離心管內(nèi)，通過用蒸餾水?dāng)?shù)次離心洗滌，然后采用適宜的固定液予以固定備用。
一般是使用四氯化鋨固定液。它是一種比較貴重的藥物，有0.1g, 0.5g或1g安培瓶三種包裝。配制2%四氯化鋨溶液，先將棕色清潔的玻瓶，盛人5ml或25ml或50ml的蒸餾水。然后將四氯化鋨安培瓶洗凈，用玻璃刀鋸破，置于蒸餾水中，以玻璃棒擊破，搖蕩，置通風(fēng)櫥內(nèi)，并避免直接受光。不可放在冰箱內(nèi)，以免揮發(fā)出來的氣體影響其他物品。同時，須用玻璃瓶儲存。因為它能穿透塑料瓶。在使用時，通常用磷酸緩沖液配制四氧化餓固定液。磷酸緩沖液的濃度為0.1mol/L，其州常為7.0-7.4,加磷酸緩沖液所需要的濃度為1%或2%。由于餓酸需要一些時間才能溶解，所以固定液最少要在使用前1天配制。在室溫下，固定液能夠保存數(shù)星期，最好將其密封，置于暗處。
脫水(基本上同石蠟切片)故從略。
包埋:包括滲透和整體包埋。滲透是使?jié)B透劑滲透到細(xì)胞內(nèi)部，實際上是對細(xì)胞內(nèi)部的各細(xì)胞器或細(xì)胞物質(zhì)進(jìn)行內(nèi)部包埋，使細(xì)胞內(nèi)的精細(xì)結(jié)構(gòu)在切片時完整無損。而一般所說的包埋是將包埋劑使整體材料小塊包埋起來，內(nèi)外“接軌”，達(dá)到包埋的目的，為下一步超薄切片作好準(zhǔn)備。
電子偏光顯微鏡常用的包埋劑主要有三種:環(huán)氧樹脂、聚脂樹脂、甲基苯烯酸脂。由于環(huán)氧樹脂具有較多優(yōu)點，故被廣泛采用。
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